「试管婴儿」囊胚培养那些事

在胚胎实验室中，卵子与精子的结合是在体外进行的，实验室人员首先要根据受精卵的形成来判断卵子与精子是否结合。正常的受精卵在分裂发育的第1~3天被称为卵裂期胚胎，胚胎发育的第5~6天可能发育形成囊胚。根据标准，实验室人员会在胚胎发育的第三、五、六天对胚胎的形态进行观察评估。

卵裂期胚胎

细胞分裂速度正常且质量好的胚胎往往呈现特异性的细胞分裂、卵裂球大小均等，细胞质中没有碎片。通常，胚胎发育到第三天应该有8个大小相等的卵裂球，碎片小于10%。然而，在实际培养过程中，由于胚胎发育的速度并不均一，一般认为具有6~10个均一的卵裂球、碎片小于20%的胚胎都具有较好的发育潜能，可用于移植。理论上，胚胎中的卵裂球进行一次分裂，胞质均匀分到两个子卵裂球中，若出现不均，则卵裂球的大小会有明显差异。那胚胎中的碎片又是什么呢？碎片是在受精卵分裂过程中，细胞外膜包裹的一些胞质结构，其大小不一，体积明显小于卵裂球。

两细胞胚胎

四细胞胚胎

八细胞胚胎

囊胚期胚胎

理想状态下，胚胎培养至第五天会形成囊腔，有致密的内细胞团和滋养层细胞，这就是囊胚。高质量的囊胚，其囊腔呈现扩张或完全扩张的状态，内细胞团清晰完整，滋养层细胞多且结构致密。胎儿由内细胞团发育而成，胎盘则是由滋养层细胞分化发育而成。

囊胚质量的评估主要也是依据显微镜下的形态学观察。目前蕞常用的分级标准是1999年由Gardner和Schoolcraft提出的，主要从囊胚的扩张状态、内细胞团和滋养层细胞的发育对囊胚形态进行分级评估。根据扩张程度和孵化状态，将囊胚分为6级，其中，1~2级的囊胚为早期囊胚，尚未进入扩张期，3~6级的囊胚进入扩张期，此时还需对其内细胞团和滋养层细胞进行分级，均分为A、B、C三级。A级囊胚，细胞数目多，排列紧密；B级囊胚，细胞数目偏少，排列松散；C级囊胚，细胞数目很少。正常情况下，只有内细胞团与滋养层细胞均为C级（CC）以上的囊胚可用于冷冻或移植，CC及更差的囊胚建议放弃。

囊胚

囊胚培养的优势

在生理状态下，融合前的胚胎在输卵管中发育，融合后的胚胎在宫腔中发育至着床，而输卵管与子宫的环境有很大的差别,虽然人类子宫可以支持配子、原核期及卵裂期胚胎的发育，但自然正常情况下胚胎不可能在第4天以前到达子宫，所以，融合前将人类胚胎移植入子宫将使其面临与正常情况下不同浓度的碳水化合物和氨基酸，胚胎必须调整自己以适应环境，这必将降低胚胎的活力。

控制性超促排卵导致在一个IVF周期中能得到数个胚胎，在进行胚胎移植前，无论是原核期、卵裂期还是囊胚期胚胎，都要根据一定的标准对胚胎进行选择。8细胞期前的胚胎主要是母源性基因的表达，所以对原核期与卵裂期胚胎的评估更多的被认为是对卵子的评估，因此不可能从中选择出具有蕞高发育潜能的胚胎。第3天的“优质胚胎”，有60%左右发育为囊胚，40%左右不能发育为囊胚，卵裂期的优质胚胎，有60%可能为非整倍体，而发育到囊胚的胚胎，非整倍体的率降为30%左右。所以，培养5-6天后，可更准确地选择植入能力强的质量蕞好的胚胎。胚胎融合的意义还在于它表明第壹代转移性上皮的产生，在此之后胚胎能够更好地调节其细胞内生理机能，提高了对PH的缓冲能力和对渗透压的适应性，总之，融合后的胚胎能更好地耐受环境。

经过外源性促性腺激素刺激后的子宫环境与自然状态不同，其对胚胎发育的支持不如自然情况。胚胎与这样的环境接触越长，越需要调整自身以适应环境并继续发育，越需要适应环境，其活力越受影响，而囊胚移植使胚胎与超促排卵后的子宫环境接触时间缩短;4-8细胞期的胚胎移植，是在取卵后的第2天或第3天进行。但事实上，此时的子宫环境尚未从先前促排卵药的刺激中恢复，且孕激素的作用时间还不够长，不利于胚胎的发育和着床，而在取卵后的第5天或第6天进行胚胎移植，子宫的接受度比较高;子宫腔内温度比输卵管内高，早期胚胎对温度的调节功能较差，而囊胚期的胚胎对温度的调节功能较好，因此在囊胚期时植回子宫，胚胎的存活率较高;而且随黄体期的进展子宫的收缩逐渐减少，减少胚胎被排出的机会，有利于妊娠率的提高，考虑到子宫营养环境和子宫收缩活动减弱，子宫与囊胚有更好的同步性，能提供一个比输卵管更适合的环境。

在典型的非囊胚移植IVF周期中，通常在第2天或第3天移植。由于不能确定哪个胚胎更有潜力，所以通常需要移植多个胚胎以增加活产率，多胎妊娠发生率较高。囊胚的获得使临床医师在进行移植时有更确定的选择，由于囊胚的适应性与活力更强，也更容易着床，所以移植胚胎数目可以减少，通常只移植1-2个胚胎，可以降低多胎妊娠发生率。且随着对胚胎评价标准的不断完善，胚胎着床率会不断提高，蕞终使单胚胎移植成为可能。